Tolerancja i chimeryzm po transplantacji komórek nerkowych i krwiotwórczych ad

Zostały one wysoko wzbogacone w komórki krwiotwórcze progenitorowe CD34 + przy użyciu kolumny z kulkami immunomagnetycznymi. Dawce x 106 komórek CD3 + T z wycieku z kolumny wstrzyknięto wzbogacone w 8 x 106 komórki progenitorowe CD34 + na kilogram. Mycophenolate mofetil (1000 mg dwa razy na dobę) podawano przez miesiąc po dożylnym wstrzyknięciu komórek dawcy. Pacjent był hospitalizowany w 21 dniu z powodu gorączki z neutropenią i został wypisany w 23 dniu. Posiew krwi był ujemny, ale gorączka szybko ustąpiła po podaniu antybiotyków. Pacjent nie był już hospitalizowany. Dwie próbki z biopsji nerki uzyskano zgodnie z protokołem ambulatoryjnym po 3 i 12 miesiącach. Cyklosporynę stopniowo zwężano i przerwano 6 miesięcy po transplantacji. W ciągu tych 6 miesięcy nie wystąpiły epizody odrzucenia ani kliniczne objawy ostrej lub przewlekłej choroby przeszczep przeciwko gospodarzowi, a chimeryzm był trwały. Pacjent wrócił do pracy około 3 miesiące po transplantacji, a próbki z biopsji przeszczepu wykazały prawidłową tkankę nerki; nie zaobserwowano nacieków komórkowych. Leki przeciwnadciśnieniowe zostały wycofane wkrótce po odstawieniu cyklosporyny. Pacjent pozostaje w dobrym stanie zdrowia 34 miesiące po transplantacji.
Metody
Kondycjonowanie
Całkowite naświetlanie limfoidalne (napromienianie nadpęcherzowych węzłów chłonnych i grasicy oraz subdiafragmatyczne węzły chłonne i śledziona) przeprowadzono w sposób opisany uprzednio9. Królicze globuliny antymitocytowe (Thymoglobulin, Genzyme) podano dożylnie, rozpoczynając od wstrzyknięcia śródoperacyjnego. Pacjent otrzymał leki profilaktyczne przeciwko infekcjom grzybiczym, bakteryjnym i wirusowym. Protokół został zatwierdzony przez instytucyjną komisję odwoławczą w Szkole Medycznej Uniwersytetu Stanforda, a wszyscy pacjenci i dawcy wyrazili pisemną, świadomą zgodę.
Komórki Dawcy
Sześć tygodni przed przeszczepieniem dawcy otrzymali 5-dniowy cykl podskórnych iniekcji czynnika stymulującego kolonię granulocytów w dawce 16 mg na kilogram na dzień, a komórki jednojądrzaste zebrano za pomocą leukoferezy. Komórki CD34 + zostały wzbogacone o kolumnę Isolex (Baxter) i poddane krioprezerwacji aż do infuzji.
Ocena chimeryzmu
Chimeryzm oznaczono za pomocą genotypowania DNA prostych markerów polimorficznych o sekwencji o sekwencji sekwencji, które kodują krótkie powtórzenia tandemowe, jak opisano poprzednio10. Chimeryzm oceniano na podstawie analizy limfocytów T, komórek B, komórek NK i granulocytów po wzbogaceniu komórek jednojądrzastych krwi. na perełki immunomagnetyczne (Dynabeads, Dynal) pokryte przeciwciałami monoklonalnymi przeciwko CD3, CD19, CD56 i CD15, odpowiednio.
Barwienie immunofluorescencyjne i analiza podgrup komórek T
Komórki jednojądrzaste krwi barwiono monoklonalnymi przeciwciałami skoniugowanymi z fluorochromem przeciwko CD3, CD4, CD8, CD62L, CD45RA, CD45RO (BD Pharmingen) i V.24, V.11 (Beckman Coulter). 11 Przeprowadzono czterokolorowe analizy za pomocą cytometrii przepływowej z stosowanie standardowych technik i sprzętu (LSR i FACS Vantage cytometers, BD Biosciences).
Analiza koła wycięcia receptora komórek T
Posortowane podgrupy limfocytów T uzyskanych za pomocą cytometrii przepływowej poddano kriokonserwacji i przesłano do Instytutu Podstawy Reagowania Immunologicznego Human Vaccine Institute na Uniwersytecie Duke a w celu analizy koła wycięcia receptora komórek T (TREC) za pomocą reakcji łańcuchowej polimerazy. Na podstawie testu.12
Odpowiedzi komórek T na antygeny
Mieszaną reakcję leukocytów przeprowadzono przez hodowlę komórek jednojądrzastych krwi obwodowej jako komórek odpowiedzi z napromienionymi allogenicznymi jednojądrzastymi komórkami lub oczyszczonymi komórkami dendrytycznymi jako komórkami stymulującymi i mierząc wbudowywanie 3H-tymidyny. 13,14 Komórki dendrytyczne oczyszczono przy użyciu gradientów metrizamidu. Obecnie opisano stymulację jednojądrzastych komórek za pomocą anatoksyny tężcowej i antygenów wirusa grypy.13,14 Stężenie interleukiny-2 i interferonu-. w supernatantach kulturowych mierzono przy użyciu komercyjnych zestawów (BD Pharmingen).
Wyniki
Rysunek 1
[więcej w: tania apteka internetowa, rehabilitacja zakopane kolejka, zastawka bauhina ]

Powiązane tematy z artykułem: rehabilitacja zakopane kolejka tania apteka internetowa zastawka bauhina